- Jared Padalecki como Sam Winchester: É o segundo filho de John e Mary Winchester. Quatro anos mais jovem do que seu irmão, Dean. Ele é diferente do seu irmão mais velho, na medida em que ele é sensível, racional, mais inocente, e aparentemente mais preocupado com a vida de uma "vida normal" do que seu irmão, a despeito de tudo isto, é evidente que ele iria fazer alguma coisa para Dean. Ele também se rebelou contra seu pai. Ele estudava na Universidade de Stanford.
- Jensen Ackles como Dean Winchester: Nascido em Lawrense, Kansas. É o filho de Mary Winchester e irmão mais velho de Sam. Desde que teve idade suficiente para usar uma arma, Dean foi treinado por seu pai para caçar “coisas” sobrenaturais, e apesar disso, tem medo de andar de avião. Suas paixões são: seu carro, mulheres e comer, além de fazer de tudo para proteger sua família. Com isso, já passou pelo inferno e pelo céu.
- Misha Collins como Castiel: É um anjo que resgatou Dean Winchester do inferno após a sua morte pelos cães do inferno de Lilith, vem a terra instruir Dean e Sam quanto a uma missão da qual os irmãos são protagonistas. Mas pela proximidade humana que estabeleceu, principalmente com Dean, recebe ordens superiores para afastar-se emocionalmente dos humanos. Porém, Castiel não cumpre as ordens superiores e ainda acaba se rebelando contra o céu.
Secundários
- Jim Beaver como Bobby Singer: Era amigo de John Winchester, quando esse morre, ele que toma conta de Dean e Sam. Além de ser experiente, Bobby é também muito inteligente. Ele sabe exatamente o que fazer quando alguma coisa dá errada, sabe examinar a situação e sabe administrar os seus dons e conhecimentos.
- Fredric Lehne como Azazel: O principal vilão das das temporadas iniciais e, até então, considerado o pricipal problema dos Winchesters a resolver. Um Demônio que marcou o começo de uma nova vida para a família Winchester, praticamente ele matou toda essa família, que diretamente causou uma nova vida para Dean, Sam e John, os quais passando a se envolver com criaturas sobrenaturais, demônio de olhos amarelos e, finalmente Azazel, o principal inimigo dos irmãos nas duas primeiras temporadas e que, mesmo estando morto, indiretamente causará um inferno no relacionamento dos dois.
- Samantha Ferris como Ellen Harvelle: É uma caçadora que administra um bar chamado Roadhouse Harvelle, em Nebraska, que é frequentado por caçadores. Mãe de Joana Harvelle, uma garota bonita e decidida, ela não suporta a ideia de a filha se tornar caçadora, ainda mais sendo parceira dos irmãos, temendo que aconteça com ela o mesmo que aconteceu com seu marido.
- Alona Tal como Jo Harvelle: É a filha de Ellen Harvelle e Anthony William Harvelle. Seu pai era um caçador e foi morto durante uma caçada com John Winchester, quando Jo era uma criança. Seu maior desejo é tornar-se uma caçadora como seu pai apesar de sua mãe ser totalmente contra isso. Apesar de ela e Dean serem aparentemente apaixonados, as circunstâncias nunca permitiram uma aproximação dos dois.
- Katie Cassidy / Genevieve Cortese como Ruby: É um demônio que escapou do inferno pelo portal aberto, tenta se aproximar de Dean e Sam, principalmente de Sam dizendo-se querer ajudá-los. Sam, mais ingênuo, parece acreditar nas boas intenções de Ruby. Porém, Dean, por mais que esse demônio, a Ruby, faça coisas até então fora do comum para poder ajudá-los e salvá-los, ele não consegue acreditar nela.
- Lauren Cohan como Bela Talbot: É uma ladra que vende tudo que põe a mão. Não se sabe muito sobre ela, só que fez um pacto com o diabo para que seus pais morresem.
- Jeffrey Dean Morgan como John Winchester: É o pai dos irmãos Winchester, levava uma vida tranquila como chefe de família até que sua mulher foi assassinada de uma forma estranha e sobrenatural. Desde então, o patriarca não pensa em outra coisa a não ser matar o demônio que tirou a vida de sua esposa. Após um trágico acidente de carro provocado pelo demônio que John até então caçava obssessantemente, vê-se obrigado a fazer um pacto com esse mesmo demônio pela vida de Dean.
- Samantha Smith como Mary Winchester: Esposa de John, e mãe de Dean e Sam. Ela era uma caçadora, até que foi assassinada por Azazel, no dia em que Sam completava 6 meses.
- Chad Lindberg como Ash: É um antigo morador dos fundos do bar de Ellen, com o seu estilo esquisitão, ele sabe muita coisa sobre computadores. Ajuda Dean e Sam algumas vezes.
- Sterling K. Brown como Gordon Walker: É um caçador assim como Dean e Sam. Porém é ficcionado por vampiros e acredita que não se deve ter piedade desses seres.
- Mark Pellegrino / Jared Padalecki como Lucifer: É o deus do inferno, liberto de sua jaula por Sam Winchester, vem a terra com planos de se apoderar de seu receptáculo e exterminar toda a raça humana.
- Richard Speight, Jr. como Gabriel: Dado originalmente como apenas um semi-deus, o arcanjo irmão de Miguel, Rafael e Lucifer, deixou o céu por dizer-se estar cansado das brigas dos irmãos. Sam e Dean descobrem que ele era um arcanjo e não apenas um Trickster porque, até então, os seus feitos estavam extrapolando os poderes de um simples ' 'Trickster.
- Julie McNiven como Anna Milton: É um anjo caído que renasceu na Terra. Ela ganhou a habilidade de ouvir as conversas dos anjos após a ressurreição de Dean, e por causa da voz, ela foi involuntariamente a uma instituição psiquiátrica com diagnóstico de esquizofrenia. Por esta razão, os demônios têm um grande interesse em em ter posse dessa garota.
- Demore Barnes como Rafael: É um dos quatro arcanjos, luta com Castiel pelos domínios do céu, que até então, estão comprometidos pela 'bagunça' do apocalipse.
